一、引言
維生素 E 作為飼料中的關鍵營養添加劑,兼具抗氧化與生理調節功能,其含量直接影響畜禽生長性能與產品品質。現行飼料中維生素 E 測定國標方法以高效液相色譜法為主,但該方法存在儀器成本高、前處理復雜、檢測周期長等問題,難以滿足基層檢測機構及飼料企業的快速篩查需求。
佑科可見分光光度計憑借操作便捷、性價比高的優勢,在食品營養檢測領域應用廣泛。本文以佑科 UV759S 可見分光光度計為檢測工具,建立飼料中維生素 E 的快速測定方法,通過優化提取與顯色條件,驗證方法的準確性與適用性,為飼料質量快速監測提供技術方案。 二、實驗部分
(一)實驗材料
儀器選用佑科 UV759S 可見分光光度計(波長范圍 190-1100nm,吸光度精度 ±0.002A)、高速離心機、超聲波清洗器。試劑包括 α- 生育酚標準品(純度≥99%)、無水乙醇(分析純)、正己烷(分析純)、聯吡啶(分析純)、三氯化鐵(分析純),實驗用水為超純水。飼料樣品選取玉米型配合飼料、豆粕型濃縮飼料及預混合飼料,經粉碎過 80 目篩后密封保存。
(二)實驗方法
樣品前處理:稱取 2.0g 飼料樣品于離心管中,加入 15mL 無水乙醇 - 正己烷混合液(體積比 1:1),超聲提取 20min,8000r/min 離心 5min,取上清液備用,全程避光操作。
顯色反應:取 2mL 上清液于比色管中,依次加入 1mL 0.2% 聯吡啶乙醇溶液、1mL 0.1% 三氯化鐵乙醇溶液,搖勻后靜置 5min,以空白試劑為參比。
檢測條件:通過佑科分光光度計波長掃描,確定維生素 E - 聯吡啶 - 三氯化鐵絡合物的最大吸收波長為 520nm,在此波長下測定吸光度。
標準曲線繪制:配制 0.02、0.05、0.10、0.20、0.50mg/L 的 α- 生育酚標準系列溶液,按上述顯色步驟操作,以濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線。
三、結果與分析
(一)標準曲線與線性范圍
佑科可見分光光度計測得的吸光度與維生素 E 濃度呈現良好線性關系,標準曲線方程為 y=1.862x+0.005,相關系數 R2=0.9997,線性范圍為 0.02-0.50mg/L,滿足飼料中維生素 E(通常含量 0.01-0.80mg/g)的檢測需求,無需多次稀釋即可直接測定。
(二)方法適用性驗證
對三種類型飼料樣品的測定結果顯示,該方法與國標高效液相色譜法的相對偏差均小于 2.8%。其中玉米型配合飼料相對偏差 1.3%-2.5%,豆粕型濃縮飼料 1.1%-2.2%,預混合飼料 1.5%-2.8%,均處于允許誤差范圍內。
針對飼料中常見的淀粉、粗蛋白、礦物質等基質,加標實驗表明,當基質濃度在常規飼料含量范圍內時,檢測結果相對偏差仍小于 3%,證明該方法抗基質干擾能力較強,適用性廣泛。
(三)精度與快速性分析
重復性實驗中,對 0.10mg/L 和 0.30mg/L 標準溶液進行 6 次平行檢測,相對標準偏差(RSD)分別為 1.23% 和 0.98%;對同一飼料樣品連續測定 6 次,RSD 為 1.45%,均低于 5% 的精度要求。加標回收實驗中,回收率在 95.6%-103.5% 之間,平均回收率 99.2%,準確性可靠。
該方法單個樣品前處理時間僅 25min,檢測時間不足 5min,相比國標方法(前處理 120min 以上),檢測效率提升 4 倍以上,實現 “快速測定" 目標。
四、討論
佑科可見分光光度計憑借穩定的波長精度與吸光度響應,為飼料維生素 E 快速測定提供了可靠儀器支撐。實驗優化的超聲提取 - 絡合顯色體系,有效縮短了前處理時間,且能抵抗復雜基質干擾。 但需注意,飼料中高含量油脂可能導致提取液渾濁,可通過加無水硫酸鈉除水改善;維生素 E 易氧化,樣品處理需全程避光。后續可進一步優化提取溶劑配比,拓展方法對高脂肪飼料的適用性。
五、結論
基于佑科可見分光光度計建立的飼料中維生素 E 快速測定方法,線性關系良好(R2=0.9997),對不同類型飼料均具有較強適用性,相對偏差小于 3%。方法精度優異,相對標準偏差低于 1.5%,加標回收率達 95%-104%。
該方法操作簡便,單個樣品檢測周期僅 30min,顯著優于傳統方法,且儀器成本低、易維護,能夠滿足飼料企業質量控制與基層檢測機構快速篩查的需求,具有重要的實際應用價值。