
分子生物學實驗室開展實時熒光定量 PCR(qPCR)檢測時,需對 96 孔板、384 孔板進行批量樣品加樣,要求移液體積精準(誤差≤±2%)、孔間重復性好(CV 值≤1%),同時需避免樣品交叉污染,保障擴增結果的準確性與可靠性。傳統單通道移液器單次僅能處理 1 個樣品孔,完成 96 孔板加樣需耗時 1 小時以上,人工操作強度大且易因手法差異導致孔間體積偏差;頻繁更換槍頭增加了樣品污染風險,且移液效率低下,難以滿足高通量 qPCR 檢測需求。為解決上述痛點,引入 8 通道 / 12 通道可調式移液器,構建 “標準化移液 - 批量加樣 - 防污染管控" 的 qPCR 樣品前處理體系,提升實驗效率與數據穩定性。
選用適配 qPCR 實驗的8 通道 / 12 通道可調量程移液器,覆蓋移液體積范圍 0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL,滿足不同體系配制需求;移液器采用人體工學設計,配備輕量化手柄與防滑指托,降低長時間操作的手部疲勞;內置量程鎖定裝置,防止移液過程中量程漂移;槍頭適配帶濾芯的無菌吸頭,有效阻隔氣溶膠污染,避免樣品間交叉污染;移液精度符合 ISO 8655 標準,小體積移液(10μL)精度 ±1.5%,大體積移液(100μL)精度 ±0.8%,孔間重復性 CV 值≤0.8%,可達到qPCR 實驗嚴苛要求。
針對 qPCR 實驗不同環節優化移液參數:
反應體系配制:采用 8 通道移液器,選擇 10-100μL 量程,低速吸液(吸液速度調至 2 檔)、勻速排液,避免槍頭內產生氣泡,確保每個反應孔體系體積一致;
樣品模板加樣:采用 12 通道移液器,選擇 0.5-10μL 量程,使用帶濾芯吸頭,每塊 96 孔板更換一次吸頭,防止模板氣溶膠污染;
標準曲線梯度稀釋:采用 8 通道移液器,配合排管架進行批量梯度稀釋,減少人工稀釋誤差,提升標準曲線線性相關系數(R2≥0.999)。
移液前預處理
移液器校準:實驗前使用標準砝碼對移液器進行校準,確認移液體積精度符合要求;
耗材準備:將帶濾芯無菌吸頭裝入移液器吸頭盒,qPCR 反應板、離心管置于超凈工作臺紫外滅菌 30 分鐘;
試劑預混:按 qPCR 反應體系配方,將引物、探針、酶、緩沖液等試劑混合均勻,置于冰浴中備用,避免試劑反復凍融。
批量加樣操作
反應體系分裝:將 8 通道移液器量程調至目標體積(如 20μL),吸取預混試劑后,垂直對準 96 孔板的 8 個樣品孔,勻速排液至孔底,避免液體掛壁;完成一列后平移移液器,依次完成整板體系分裝,全程僅需 5 分鐘;
樣品模板加樣:將 12 通道移液器量程調至模板體積(如 5μL),吸取離心管中的樣品模板,對應加入 qPCR 反應板的樣品孔,加樣后輕彈反應板側壁,使液體充分混合;
防污染管控:加樣過程中,移液器槍頭避免接觸反應孔內壁,每處理完一批樣品,及時更換吸頭并對移液器吸頭連接端進行酒精擦拭消毒。
移液后處理
反應板密封:加樣完成后,使用 qPCR 專用封板膜密封反應板,離心去除氣泡后放入 qPCR 儀;
移液器清潔:實驗結束后,用 75% 酒精擦拭移液器表面,拆卸吸頭彈射器進行清潔,干燥后存放于移液器支架上。
移液效率大幅提升:完成一塊 96 孔板的加樣工作,從傳統單通道移液器的 60 分鐘縮短至 10 分鐘,效率提升 500%,日均可完成 10-15 塊 96 孔板的樣品前處理,滿足高通量 qPCR 檢測需求;
實驗數據穩定性優化:孔間移液體積偏差從 ±5% 降至 ±1.5%,qPCR 擴增曲線的孔間重復性 CV 值≤1%,標準曲線線性相關系數穩定在 0.999 以上,實驗結果準確性與可靠性顯著提升;
污染風險有效降低:帶濾芯吸頭的使用配合嚴格的操作規范,使樣品交叉污染率從 8% 降至 0,杜絕氣溶膠污染導致的假陽性結果;
操作強度顯著降低:人體工學設計的多通道移液器減少了手部操作頻次,降低了實驗人員的勞動強度,提升了實驗操作的舒適性與便捷性。
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